PA12小鼠胚胎成纖維細胞

細胞名稱:             PA12小鼠胚胎成纖維細胞

種屬來源:             小鼠

組織來源:             胚胎

疾病特征:             正常

細胞形態:             成纖維細胞樣

生長特性:             貼壁生長

培 養 基:             DMEM培養基，90%；FBS，10%。

生長條件:             氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃, 

傳代方法:             1：2至1：6，每周2次。

凍存條件:             90% 完全培養基+10% DMSO，液氮儲存

支原體檢測:             陰性

特點和簡介
該細胞來自NIH/3T3，可作逆轉錄病毒的包裝細胞

接受后處理
1)  收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。

2)  請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

3)  PA12小鼠胚胎成纖維細胞 棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的完全培養基。

4)  如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。

5)  接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

培養操作
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，細胞變圓脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養注意事項
1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及時和我們聯系。

2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。

3.用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待細 胞匯合度  80%左右時正常傳代。

5.請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。

6.建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術 部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7.PA12小鼠胚胎成纖維細胞 該細胞僅供科研使用。